x

Einloggen

Hast du noch keinen Account? Jetzt registrieren!

Часта задаваемыя пытанні

Original on www.med.umich.edu


Што такое трансгенныя ядры рабіць?
Трансгенныя ядры рэгулярна прэпаруюць мадыфікаваных мышэй і пацукоў для ўніверсітэцкіх даследнікаў Мічыган. Гэтыя жывёлы могуць быць скарыстаны для даследавання функцыі генаў, экспрэсія генаў, ген рэгулявання, распрацаваць жывёльных мадэлях хваробы чалавека, каб праверыць тэрапіі рэагентаў гена, стварыць клеткі, узятыя ад спецыфічныя тыпы клетак ператвараецца у натуральных умовах, вырабляць тканіны мышэй з пэўным індуцыбельнай экспрэсіі генаў ці тканіны спецыфічнага гена выдалення, ці для вывучэння эфектаў клеткавай пэўных абляцыі з токсігенемі.

Мы падаём доступ да нашай мицроманипоулатион і эмбрыёнаў ствалавыя клеткі працоўных месцаў нароўні з неабходнымі рэагентамі:

  • спецыялізаваныя плазміды
  • эмбрыянальных ствалавых клетак (ES) клеткавых ліній
  • FBS
  • падачы камерах, прызначаных для культур клетак, ES.

  • Трансгенныя ядры падае дапамога рэпрадукцыі тэхналогіі для мышэй і пацукоў, у тым ліку
    • экстракорпоральное апладненне з exand жывёльных асад ці падрыхтаваць два вочкі для яйкаў
    • скнкўзкуыкмфешўт з 8-секцыйная яйкі
    • кріоконсервація спермы
    • аднаўленні жывых жывёл з кріоконсервірованных матэрыялаў
    • інтрацітоплазмід уводзіны спермы

    Трансгенныя ядры адбываецца пэўных патогенов вольнай мышэй і пацукоў з патагенных заражаных жывёл.

    Навучальна-практычнае даказана твараў ва ўсіх аспектах трансгенных тэхналогій.

    Гл. пералік паслуг ці прачытаць падрабязнае апісанне паслуг.

    Як я магу прадставіць трансгенов?
    Наведаеце уяўленні старонкі для атрымання інструкцый.


    Колькі гэта варта?
    Мічыганскі ўніверсітэт следчых агляд платы графіку.
    Чальцы наступныя Мічыганскага ўніверсітэта цэнтры атрымліваюць зніжкі:


    Запыт на абслугоўванне Формы даступныя па загрузцы.

    Калі мой запыт на абслугоўванне апрацоўвацца?
    Трансгенныя ядры прыярытэты ўсе запыты на абслугоўванне па прынцыпе "першым прыйшоў, першым абслужаны" аснове. Гэты стандарт ужываецца для ўсіх аднолькава, нават нашы дырэктараў факультэта. Чакай паміж трансгенных уяўленні мікроінъекціі ДНК і рэгулярна абнаўляецца. Звычайна ES вочкі працы плануецца 2:59 месяцы. З моманту стварэння трансгенных ядры нашай палітыкі з'яўляецца тое, што ніводны праект, няхай гэта будзе ген арыентацыі на клеткі ES ці трансгенных мадэль мышы, увойдуць у працоўнай чарзе, пакуль усе неабходныя матэрыялы падаюцца. Гэта складаецца з як навуковыя матэрыялы, такія як узоры ДНК і генотіпірованіе тэстаў, а таксама дакументы, такія як дазвол на выкарыстанне жывёл у навуковых даследаваннях, дамовы пра перадачу матэрыялаў і аплатную інфармацыю.

    Наколькі эфектыўным з'яўляецца трансгенных ядры?
    Абодва трансгенных і геннай арыентацыі эфектыўнасці выдатна. Мы гарантуем, што прынамсі тры трансгенных заснавальнікаў будзе вырабляцца (сярэдні нумар 10). З 1989 гады больш 13 тысяч трансгенных заснавальнікаў былі выраблены з больш за 1300 трансгенных канструкцый. Гэтыя эфектыўнасці вытворчасці трансгенных роўная ці перавышае значэнні ў апублікаванай літаратуры трансгенныя мышы. Эфектыўнасць усіх крокаў у геннай арыентацыі горш, чым з літаратурай каштоўнасцяў. Некалькі эмбрыянальных ствалавых клетак (ES) клеткавыя лініі былі імпартаваны і правераны на фармаванне палавых хімера. Акрамя таго, мы распрацавалі нашу ўласную 129X1/SvJ ES клетак лініі "Pat5". Прагледзець спіс клеткавых ліній ES. Мы супрацоўнічалі са следчымі, каб стварыць больш 200 новых ліній мышэй з клетак, ES мутаваў у хомлогоус рэкамбінацыі генаў з арыентацыі вектараў.

    У дадатак да распрацоўкі мадэляў мышэй генетычных захворванняў трансгенных ядра выпусціў больш 300 трансгенных заснавальнікаў пацука з больш за 44 трансгены. Акрамя таго, мы падрыхтавалі накаўтам пацукоў на пяць-шэсць генаў выкарыстаннем пальца нуклеаз цынку.


    А кансультацыі?

    Мы падаём кансультацыі па ўсіх аспектах гэтай тэхналогіі з эксперыментальных дызайн мышы селекцыі. Мы можам падаць пратаколы і прафесійнай падрыхтоўкі для кожнага кроку падчас стварэнні трансгенных генаў ці мэтавых мышэй. Мы гатовыя да ўзаемадзеяння, нашы дзверы заўсёды адкрыты, калі ласка, звяжыцеся з намі па любых пытаннях сустрэцца з супрацоўнікамі.

    Якія дакументы ў гэтым удзельнічае?
    Любы праект, які выкарыстоўвае мышэй павінны быць ухвалены універсітэт Камітэта па выкарыстанні і сыходу за жывёламі. Concat UCUCA для інармацыі пра тое, як подать заяўку на permision выкарыстоўваць хрыбетных жывёл пры тэставанні навуковых даследаванняў ці навучанні. Група для лабараторных жывёл медыцыны падае стойлового ўтрыманні скаціны і ветэрынарнай дапамогі. Следчыя, зацверджаных для даследаванняў на жывёл, як чакаецца, забяспечыць Улама з кароткі нумар, які можна выкарыстоўваць для аплаты ветэрынарных паслуг і выдаткаў на жыллё. Трансгенныя формы ўяўлення ядра запатрабуецца наступная інфармацыя:

  • UCUCA нумар афіцыйнага сцвярджэння,
  • Улама кароткі нумар нумар для стойлового ўтрыманні скаціны і ветэрынарнай дапамогі

  • Што такое трансгенныя мышы ці пацукі?
    Трансгенныя мышы ці пацукі трансгенов у дадатак да сваіх звычайных камплектам генаў. Трансгена з'яўляецца штучны ген кланаваны ў лабараторыі па тэхналогіі рэкамбінантнай ДНК і мікроінъецірованных у аплодненай мышы ці пацукі яйка. Яйкі перададзены ў прыёмныя маці для цяжарнасці. Нашчадствы трансгенных выгадоўваюць для атрымання радка. Трансгенов інтэгравацца выпадкова на хромосомных ДНК і перадаецца ў якасці Мендэля прыкметы.

    Што такі ўдзел у прыняцці трансгенных мышэй / пацукоў?
    ядры можна азнаёміцца на ўсіх этапах трансгенных даследаванняў. Следчы канструкцый і іх клоны трансгенов і развівае генотіпірованія аналізу з ы мястэчка копію гена адчувальнасці, як правіла, ПЦР аснове. Генотіпірованія тэст, які вызначае адзіны ген эндагенных копію ў мыш ці эндагенных генаў у пацукоў з'яўляецца неабходным дадатнага кантролю. Тэсты для трансгенов і эндагенных генаў выкарыстоўваюцца для тэставання ўсіх магчымых трансгенных мышэй заснавальнікам ці пацукоў. Спалучэнне аналізаў выключае як ложноотріцательных і прытворнададатных няправільнай ідэнтыфікацыі. Трансген ДНК чысціцца на трансгенных ядры для мікроінъекціі з абмежаваннем дайджэст пастаўляюцца следчага. ядры microinjects ДНК у аплодненай (C57BL / 6 X SJL) F 2 яйкі і пераклады яйка ў псевдобеременных мышэй. Акрамя таго, мы будзем рабіць трансгенных мышэй, у іншых генетычных асаблівасцяў, па іх просьбе. Мы паспяхова зрабіў трансгенных мышэй C57BL / 6 X SJL) F 2, FVB / N, C57BL / 6, (C57BL / 6 X DBA / 2) F2, ПВР B10D2 congenic штамаў, і мутантавыя штамы, такія як mnd2, Myo15sh2 і C57BL/10ScSn-Dmdmdx/J. Калі дзіцяняты 2 тыдні ад роду, ядры ставіцца юха і хвост тэгі біяпсіі атрымлівае ад мышэй. ядры падасць хвост біяпсіі да следчага. Следчыя могуць падрыхтаваць геномной ДНК з хваста біяпсіі уручную ці які-небудзь са шматлікіх набораў на рынку (гл. пратаколы ). Следчы будзе вызначыць трансгенных мышэй з дапамогай ПЦР. Трансгенных мышэй перадаюцца следчаму для гадоўлі і аналіз экспрэсіі трансгена.

    Што я магу зрабіць, каб максімальна паспяховага трансгенных вынік?
    Мы гарантуем, што вы будзеце атрымліваць 3 ці больш трансгенных мышэй і пацукоў, аднак мы не можам гарантаваць экспрэсіі трансгена ці перадачы. Найлепшай стратэгіяй з'яўляецца выкарыстанне прамоўтар, які ўжо добра характарызуюць у трансгенных мышах, ці выкарыстоўваць вельмі вялікі флангавых раёнах больш 10 Kb. Акрамя таго, бактэрыяльных штучных храмасом могуць быць скарыстаны для прамой экспрэсіі генаў. ДКЦ з'яўляюцца ўключаць больш 100Кб геномной ДНК і часта накіроўваюць экспрэсіі генаў у модзе, якія зачыняюцца матчы экспрэсіі эндагенных генаў.

    Ураджайнасць трансгенных аптымізавана шляхам уводзін высокоочіщенных лінейных фрагментаў ДНК з выступалымі канцамі. Выдаліць гэтулькі паслядоўнасць вектару, наколькі можна, пабудаваць з пракарыёт паслядоўнасці перашкаджаюць экспрэсіі трансгена. Хоць гэта і не гарантыя, прадэманстравалі свой выраз у лініі клетак з'яўляецца дадатным паказчыкам у натуральных умовах выразы і забяспечвае хуткі і недарагі спосаб прадэманстраваць, што трансгенов было пабудавана правільна. Кантакт Том Сондерс больш падрабязную інфармацыю пра трансгенныя дызайну.

    Колькі трансгенных мышэй / пацукоў я буду атрымліваць?
    Мы гарантуем, што Вы атрымаеце мінімум 3 трансгенных заснавальнікаў, часта больш. Чысціня мікроінъекціі ДНК з'яўляецца самым важным фактарам, які вызначае, колькі трансгенных заснавальнікаў будуць падрыхтаваны. Іншым вельмі важным параметрам з'яўляецца надзейнасць і адчувальнасць экрана трансгена.

    Што рабіць, калі ДНК пабудаваць смяротная?
    Калі вы лічыце, што будаваць могуць быць фатальнымі, мы будзем супрацоўнічаць надаць нейтральных фрагментаў ДНК у якасці маркера. Калі трансгена не смяротны, то мышэй як з трансгенов і нейтральных маркер будзе выяўлена. Аднак, калі толькі мышэй з нейтральным маркера выяўляецца, тое пабудаваць, верагодна, будзе эмбрыянальных смяротным зыходам. Ці ж вы вырашыце вывучыць трансгенных заснавальнікаў. Трансгенных эмбрыёнаў могуць быць прааналізаваны на розных узростаў развіцця для вызначэння часу смерці падчас цяжарнасці.

    Што такая значная колькасць трансгенов копію?
    Для большасці трансгенов у колькасці дзід не карэлюе з узроўнем экспрэсіі. Бываюць і выключэнні, калі буйныя фрагменты геномной выкарыстоўваюцца для стварэння трансгенных. Прыклады ўключаюць P1 клонаў (90 Kb), ДКЦ (180 Kb), ці МЦ (400 Kb). Па некаторых паведамленнях, калі вы выкарыстоўваеце локус кантролю рэгіёнаў ці матрыцы рэгіёнаў укладання вакол трансгенов, што вы зможаце ахаваць калі інтэграцыя эфекты форме. Папярэдняя праца ў літаратуры, паказаў, што спробы атрымання невялікай колькасці копіі microinjecting разведзеных ДНК, не ўплывае на лік дзід, але і змяншае агульнае выйсце трансгенных мышэй.

    Што рабіць, калі трансгенов вельмі вялікае?
    Памер трансгена не павінна ўмешвацца ў вытворчасць трансгенных мышэй. Вялікі трансгенов можа быць цяжка клон. Вы, магчыма, пажадае разгледзець пытанне о BAC recombineering для вытворчасці вялікага трансгенов, змешчаных пад кантролем рэгулятарных элементаў у BAC. ядра выпусціла трансгенных ад бактэрыяльнай храмасомы штучны да 180 кб. Ёсць паведамленні, у літаратуры трансгенных мышэй вырабляюцца з мікроінъекція 90 Kb P1 клонаў, 248 Kb дрожджаў штучныя храмасомы, і нават мікродіссекціі фрагментаў храмасом.

    Што такое генная мэтавых мыш?
    Гена мэтавых мышэй, атрыманых з эмбрыянальных ствалавых клетак (ES) клетак. ЭС клеткі маніпуляваць у культуры шляхам уводзін арыентацыі вектару, кланаваны ў лабараторыі па тэхналогіі рэкамбінантнай ДНК. Арыентацыі вектару ДНК менавіта замяняе сегмента хромосомной ДНК (адгэтуль і назва "генетычны арыентацыі") у вочку ES. Ствалавыя клеткі ўводзяцца ў звычайнай бластоцісты мышы, дзе яны змяшаліся з эмбрыёна вочкамі ў форме якія развіваюцца мыш. Да 100% у выніку мышы хімера можа быць сфармаваны з клетак, адбываецца ад клеткі ES. ES вочкі атрыманых мышы хімер разводзяць звычайных мышэй да прайгравання нашчадства правядзення мэтавы ген, які перадаецца ў выглядзе Мендэля прыкметы.

    Што такі ўдзел прыняцця мэтавых генаў мышэй?
    Асноўным каменем перапоны ў гэтым працэсе з'яўляецца выяўленне ES вочкі клонаў, якія прайшлі гамалагічнай рэкамбінацыі паміж арыентацыі вектару і храмасом у клетцы ES. Для максімальнага поспеху: 1) пераканацца, што геномной ДНК у арыентацыі вектару ізогенных з клеткай пытанне Е. лінію і дзве) распрацаваць гібрыдызацыі экран, які выявіць дзікіх генаў і ў 2 мкг геномной ДНК клеткі ЧС. Мы рэкамендуем Вам звязацца з Тома Saunders для кансультацыі па таргетынг вектар дызайн і на ўсіх этапах гена арыентацыі навуковых даследаванняў. Першым крокам у гэтым працэсе складаецца ў атрыманні і карту і паслядоўнасць геному 129X1/Sv клон гена цікавасці. 129X1/Sv бібліятэка даступная для адбору з асноўных фондаў. Следчы канструкцый і іх клоны арыентацыі вектару і чысціць яго для электропораціі у эмбрыянальных ствалавых (ЭС) клетак. ядры мае мноства плазмід, прызначаныя для арыентацыі вектару будаўніцтвы. Арыентацыі вектару затым электропораціі у клеткі ES персанала ядра, клоны, узяў за адбор ЛС, клоны кріоконсервірованных пры -80 З, а следчы экраны ДНК клонаў для выяўлення тых, якія прайшлі гамалагічнай рэкамбінацыі. Акрамя таго, ядры навучым Вас, у культуры клетак ES і падаць вам праверку на якасць рэагентаў і прасторы ў шматкарыстальніцкіх мышыных эмбрыянальных ствалавых клетак лабараторыі, што дазваляе выконваць працу самастойна. Пасля следчы ізалятаў euploid клонаў ES, якія прайшлі з гамалагічнай рэкамбінацыі арыентацыі вектару яны мікроінъецірованных у мыш бластоціст і перададзены ў псевдобеременных атрымальнікаў. Калі ў выніку дзіцяняты тры тыдні ад роду, яны забілі за ўнёсак вочка ES і перададзены следчаму для гадоўлі і аналізу.

    Што я магу зрабіць, каб максімальна паспяховай геннай арыентацыі вынік?

    • Ахарактарызаваць геномной структуры вашага старанна.
    • Распрацоўка адчувальных экран для гамалагічнай рэкамбінацыі ў клетках ES.
    • Разгледзім біялагічнага выніку мутацыі вы прадставіць.

    Мы можам гарантаваць, што мы будзем уводзіць ваш эмбрыянальных ствалавых клетак (ES) клетак у мінімум 50 бластоціст для ES мышы хімера адукацыі клетак. З-за ўласнай зменлівасці ў асобнай клеткі ES клонаў, мы не можам гарантаваць, што хімеры будуць выпускацца ці яны будуць перадаваць мэтавага гена шляхам палавых. Такім чынам, мы рэкамендуем вам вылучыць прынамсі тры клона для мікроінъекціі. У супрацоўніцтве з іншымі лабараторыямі на кампусе, мы паспяхова мэтавых больш 60 генетычных локусов. Мы ўпэўнены ў тым, што мы можам працаваць з вамі, каб генетычна мадыфікаваць новых ліній мышэй, якія нясуць мутацыі раман каштоўнасць для вашага даследавання. ядры забяспечвае генаў плазмід арыентацыі ES клеткавых ліній, якія былі правераны на фармаванне палавых хімера, падачы клетак для клеткавай культуры ES, FBS тэставанне на культуры клетак ES і падрыхтоўкі кадраў у патрабавальных прыёмы, неабходныя для паспяховай культуры клетак ES. Кантакт Том Сондерс больш падрабязную інфармацыю пра генную арыентацыю праектаў.

    НІЗ IRP Кіраўніцтва па даступнасці трансгенных / Жывёлы Кноцкоут

    Трансгенныя і ген "накаўт" жывёл, якія былі распрацаваны з дапамогай НІЗ IRP (вочнай праграмы даследавання) сродкі і рэсурсы будуць прадстаўлены іншыя лабараторыі, пасля публікацыі апісання жывёл у якія рэцэнзуюцца літаратуры. Гэта абавязанне НІЗ вочнай навуковых, каб такіх жывёл шырока даступныя для даследчых мэт. Гэта можа быць дасягнута шляхам прыняцця мер па адпраўляць якія гняздуюць пар у цэнтральнае сховішча, напрыклад, індукаванага мутанта рэсурсаў у лабараторыі Джэксана. Гэта дазволіць забяспечыць наяўнасць чыстай, генетычна адрозніваецца жывёл на працягу года час. Варта распачаць высілкі для скарачэння дублявання высілкаў шляхам стварэння сумесных эксперыментаў па магчымасці, аднак гэта не павінна выкарыстоўвацца ў якасці механізму, перашкаджаюць размеркаванню жывёл.

    Гэтыя кіраўнічыя прынцыпы для IRP у наш час у адпаведнасці з інтарэсамі ЗША Служба грамадскай аховы здароўя (PHS) для завочнай супольнасці: "Гэта палітыка PHS, каб зрабіць даступнымі для грамадскасці вынікаў і дасягненняў дзейнасці, якія ён фінансуе ... Таму, калі гэтыя рэсурсы распрацоўваюцца за кошт сродкаў, PHS і злучаныя з вынікамі даследаванняў былі апублікаваны ці пасля таго як яны былі прадстаўлены ўстановамі ў рамках дамовы, важна, каб яны былі даступныя для даследчых мэт, каб кваліфікаваныя адмыслоўцы ў рамках навуковай супольнасці. Гэта палітыка распаўсюджваецца на гранты, дамовы пра супрацоўніцтва і кантракты ".

    Гэтыя рэкамендацыі дапаўняюць ужо абхоплены НІЗ Кіраўніцтва для іншых выглядаў біялагічных матэрыялаў і рэсурсаў. НІЗ Кіраўніцтва даступна ў Інтэрнэце.



    Аглядныя артыкулы

    Auerbach AB, Norinsky R, Ho W, Losos K, Guo Q, Chatterjee S, Joyner AL. 2003. Strain-dependent differences in the efficiency of transgenic mouse production. Transgenic Res. 12:59-69.

    Adams DJ, van der Weyden L.Contemporary approaches for modifying the mouse genome. 2008. Physiol Genomics. 34::225-38.

    Fielder TJ, Barrios L, Montoliu L. 2010. A survey to establish performance standards for the production of transgenic mice. Transgenic Res. 19:675-681.

    Hughes ED, Qu YY, Genik SJ, Lyons RH, Pacheco CD, Lieberman AP, Samuelson LC, Nasonkin IO, Camper SA, Van Keuren ML, Saunders TL.2007. Genetic variation in C57BL/6 ES cell lines and genetic instability in the Bruce4 C57BL/6 ES cell line. Mamm Genome. 18:549-558.

    Кнігі  MIRLYN: The University of Michigan Online Public Access Catalog
      Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique. Freshney, RI. 2005. Wliey-Liss. New York.
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QH 585.2 .F741 2005
      Taubman Medical - Reference | QH 585.2 .F741 2005

      Gene Targeting. Sedivy, JM, Joyner, AL. 1992. W.H. Freeman. New York .
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QH 442 .S431 1992

      Gene Targeting: A Practical Approach, 2nd Edition. Joyner AL, ed. 2000. IRL Press at Oxford University Press. New York.
      Taubman Medical QH 442 .G43851 2000

      Guide to Techniques in Mouse Development. Wassarman, PM, DePamphilis, MR, eds. Methods in Enzymology, vol. 225. Academic Press, New York.
      Shapiro Science- Book Stacks - QP 601 .C72

      Mammalian and Avian Transgenesis: New Approaches. Pease, S and Lois, C. 2005. Springer-Verlag. Berlin, Germany.
      Taubman Medical Library QH 442.2 .M2571 2006

      Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual. Hogan B, Beddington R, Constantini F, Lacy E. 1994. Cold Spring Harbor Press. New York.
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QL959 .M2651 1986Library Info

      Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual. Nagy, A, Gertsenstein, M, Vintersten, K, Behringer, R. 2003. Cold Spring Harbor Press. New York.
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QL 959 .M2651 2003

      Methods in Enzymology. Guide to Techniques in Mouse Development. 1993.  Edited by Paul M. Wassarman and Melvin L. DePamphilis. Vol. 225.
      Taubman Medical Library --Call No: Journals

      Mouse Genetics: Concepts and Applications. Silver, LM. 1995. Oxford University Press. New York.
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QH 432 .S561 1995

      Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells; A Practical Approach.Robertson EJ, ed., IRL Press at Oxford University Press, 1987.

      Transgenic Animals. Grosveld F, ed. 1992. Academic Press. New York.
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QH 442.6 .T73 1992

      Animal Transgenesis and Cloning. Houdebine, L-M. 2003. Wiley, John & Sons, Incorporated. Hoboken, New Jersey.

      Transgenic Mouse Methods and Protocols. Methods in Molecular Biology vol. 209.  Hofker, MH,and van Deursen, J. 2002. Humana Press. Totowa, New Jersey.
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QH 506 .M451 v.209

      Transgenic Animal Technology: A Laboratory Handbook. 2nd Edition. Pinkert, CA. 2002. Academic Press, New York.
      Shapiro Science - Book Stacks - 4th floor | QH 442.6 .T691 2002